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BCIP和NBT是碱性磷酸酶的常用底物，在ALP的催化下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。

本试剂盒可用于细胞或组织的ALP显色包括诱导多功能干细胞iPS的鉴定，也可用于Western等结合有ALP的膜的显色检测或者细胞或组织内源性的ALP显色。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• BCIP对人体有刺激性，NBT对人体有害，请注意适当防护。
  
• 操作过程中，尽量避免强光照射。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 按照如下比例依次加入各溶液，混匀后即配制成BCIP/NBT染色工作液：
  

  成分	3.03mL	10.1mL
  ALP Color Buffer	3mL	10mL
  300×BCIP Solution	10μL	33μL
  150×NBT Solution	20μL	67μL

  
  
• 对于组织切片或细胞样品或膜，在与碱性磷酸酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min；对于检测内源性碱性磷酸酶的组织或细胞样品，固定液固定后用洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
  
• 洗涤完毕后，去除洗涤液。
  
• 加入适量BCIP/NBT染色工作液，确保能充分覆盖样品。
  
• 室温避光孵育5～30min或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。
  
• 去除BCIP/NBT染色工作液，用蒸馏水洗涤1～2次即可终止显色反应。
  
• 对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如有必要可用中性红染色液染色，以便于观察；对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。